Universidade Federal Fluminense 2023
A técnica de multiplicação de moléculas de DNA em laboratório desenvolvida por meio de uma reação em cadeia da polimerase (PCR) se baseia no processo celular de duplicação de DNA. É caracterizado como uma das grandes invenções da Ciência e, consequentemente, vem sendo uma das técnicas mais realizadas em laboratórios de biologia molecular. O método de PCR apresenta algumas etapas distintas: desnaturação, anelamento e extensão (ou polimerização).
Sobre o anelamento é correto afirmar que:
a DNA polimerase promove a ligação fosfodiéster entre o último nucleotídeo da nova fita e nucleotídeo trifosfatado a ser adicionado.
pela disponibilidade de extremidade 3’OH dos primers, a enzima DNA polimerase realiza a síntese das novas fitas utilizando as originais como molde.
as moléculas de DNA são inicialmente desnaturadas por alta temperatura (acima de 90°C).
em razão da característica antiparalela da dupla fita de DNA, é citado que um primer se liga na extremidade 3’ da região alvo (primer direto ou forward), enquanto o outro se liga na extremidade 5’, na fita oposta (primer reverso ou reverse).
as duas fitas das moléculas são separadas pelo rompimento das ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas de nucleotídeos complementares.
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